KM71H

價格:800元

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畢赤酵母菌株基本信息

出品公司: Invitrogen
感受態細胞名稱: KM71H酵母, KM71H畢赤酵母
菌株類型: 畢赤酵母
產品目錄號: C182-00
培養基: YPD培養基
生長條件: 28-30 ℃,  有氧
基因型: aox1::ARG4, arg4
表型: MutS, Arg+
抗性: 氨芐和卡那
質粒轉化條件: 電轉
應用: 蛋白表達
誘導方法: 甲醇
菌株特點:
KM71H是畢赤酵母菌株,屬于真核細胞。一般的針對原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對酵母是無效的,因此為了防止大腸桿菌等原核生物對酵母培養菌株污染,往往會在培養基中加入一些氨芐和卡那霉素的抗生素,來抑制細菌菌的污染和生長。

畢赤酵母適宜的生長溫度是28至30度,溫度超過32度對蛋白的表達是有害的,并可能導致細胞的死亡。

KM71H畢赤酵母可以在YPD培養基中生長。

KM71H畢赤酵母被推薦用來表達含有Zeocin抗性的載體載體重組質粒,例如pPICZ A,B,C系列的載體。

在篩選KM71H重組轉化菌株時,Zeocin抗生素的工作濃度是100 ug/ml。

KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一個片段缺失,當pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C轉化到KM71H中時只能產生出MutS轉化株,不必在進行Mut基因型的篩選了。

KM71H的來源母細胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一個突變,這使得菌株無法在不含有精氨酸的培養基中生長。而KM71H酵母細胞中在AOX1基因處插入了一個正常的arg4基因,從而形成了KM71H的MutS, Arg+   表型。

將約2kb 的Arg4基因克隆出來后插入到KM71H來源菌株內的野生型的AOX1基因的BamH I(16 bp)和Sal I(227 bp)中間,從而構建成功KM71H。ARG4基因直接替換了AOX1基因 的16-227片段序列。

KM71H畢赤酵母細胞的優點是不需要利用甲醇minimal media篩選菌株的Mut基因型,因為所有的轉化株都是MutS菌株。另外,AOX1基因并沒有被完全刪除,理論上你可以用自己的基因替換其中的Arg4基因,從而生成MutS, Arg-的轉化株,但是由于實驗表明該基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生長,所以并不鼓勵大家進行這種基因替換嘗試。

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畢赤酵母菌株應用舉例

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