DH10Bac

價格:1000元

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感受態細胞基本信息

出品公司: Invitrogen
感受態細胞名稱: DH10Bac
菌株類型: E.coli
產品目錄號: 10361-012
培養基: LB培養基
生長條件: 37 ℃,  有氧
基因型: DH10Bac感受態細胞菌株基因型
抗性: 卡那,四環素
質粒轉化條件: 42 ℃熱激
應用: 重組桿粒生產菌株
誘導方法: --
菌株特點:
DH10Bac感受態細胞是用來生產用于真核細胞蛋白表達的重組桿狀病毒分子。

高效DH10Bac細胞含有父Bacmid的bMON14272和輔助質粒pMON7124。父Bacmid的包含一個小型F復制子,卡鈉霉素抗性基因,attTn7重組位點和lacZα互補因子。輔助質粒包含的tnsABCD的區域,提供了轉座蛋白,這些轉座蛋白可以 供體質粒(Donor plasmid)上的小Tn7位點插入到父本Bacmid的重組目的位點。輔助質粒pMON7124包含有四環素抗性(Tetracycline).

DH10Bac感受態細胞本身含有卡那霉素和四環素抗性。在制作感受態細胞的時候,需要加入這兩種抗生素,以防止DH10Bac中的質粒父本桿粒bMON14272(卡那霉素抗性)和輔助質粒pMON7124(四環素抗性)在細胞擴增過程中丟失,提高質粒轉化后的基因轉座效率。

攜帶Tn7轉座元件的 供體質粒pFastBac,含有慶大霉素抗性基因,桿狀病毒多角體啟動子,一個多克隆位點區域和SV40的poolyadenylation信號。 重組的Bacmid分子通過將多克隆位點包含有基因編碼序列的 供體質粒pFastBa質粒DH10Ba感受態細胞轉化與在編碼序列克隆到多個克隆網站(重組成功的質粒在選擇性培養基平板上呈現為白色菌落)。然后可以將重組Bacmid進行挑菌,小量提取分離并且轉染到昆蟲細胞,從而進行感染重組桿狀病毒顆粒生產。

高效DH10Ba感受態細胞的能夠有效抵抗連接酶和連接酶緩沖液,同時可以容忍少量未稀釋的連接反應。 φ80dlacZDM15標記可以利用Bacmid載體中的β-半乳糖苷酶基因α-互補使用含X-gal平板培養基的藍白斑菌落篩選。

綜上所述,DH10Bac感受態細胞本身含有卡那霉素和四環素抗性,而供體質粒pFastbac含有慶大霉素的抗性,所以在制備DH10Bac感受態細胞時需要在培養時添加卡那霉素和四環素,而在制備桿粒時需要使用卡那霉素,四環素,慶大霉素的三抗平板。

感受態細胞特點和簡介

感受態細胞制備方法

感受態細胞操作方法

感受態細胞注意事項

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感受態細胞應用舉例

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